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Proteintech一級代理
產(chǎn)品時間：2020-05-29
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MARCKSL1抗體1出版物
兔多克隆| 貨號：11422-1-AP
物種特異性：人類，老鼠
在以下位置檢測到正白平衡：人腦組織
在以下方面檢測到陽性IHC：人肺癌組織，人肝癌組織，人胰腺癌組織
經(jīng)過測試的應(yīng)用
應(yīng)用范圍：WB，IHC，ELISA
應(yīng)用程序未經(jīng)測試？請參閱我們的保證
注意：建議使用pH 9.0的TE緩沖液進(jìn)行抗原回收；（*）或者，可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)
推薦稀釋度：
白平衡：1：500-1：1000
IHC：1：20-1：200
取決于樣品，在“驗(yàn)證”選項(xiàng)卡中檢查數(shù)據(jù)
資源：兔子
純化方法：抗原親和純化
同型：IgG抗體
存儲：具有0.1％疊氮化NA和50％甘油pH 7.3的PBS。儲存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲存。
免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967
全名：類馬克1
計(jì)算分子量：195aa，20 kDa
觀察分子量：48 kDa的
GenBank登錄號：BC007904
基因編號（NCBI）：65108
基因符號MARCKSL1
同義字F52，Mac MARCKS，MACMARCKS，MARCKS like 1，MARCKS like protein 1，MARCKS related protein，MARCKSL1，MLP，MLP1，MRP
MARCKS樣蛋白1（MARCKSL1）在神經(jīng)組織中廣泛表達(dá)，也被稱為MARCKS樣蛋白（MLP）或MARCKS相關(guān)蛋白（MRP），屬于MARCKS家族，是高度酸性的肉豆蔻酰化家族底物廣泛分布在包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞類型中。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化，該蛋白質(zhì)的計(jì)算分子量為20 kDa，表觀分子量為42-48 kDa。MARCKSL1的遺傳破壞導(dǎo)致神經(jīng)管閉合缺陷，取決于肌動蛋白功能，細(xì)胞形狀和細(xì)胞遷移的協(xié)調(diào)控制的事件。人們認(rèn)為MARCKSL1調(diào)節(jié)肌動蛋白的細(xì)胞骨架，從而參與主要的細(xì)胞反應(yīng)，如吞噬作用，分泌，運(yùn)動，有絲分裂和膜運(yùn)輸。
免疫印跡和免疫沉淀法: 細(xì)胞裂解物的制備: 將 ripa 緩沖液加入細(xì)胞(35mm 的培養(yǎng)皿中加入100l，60mm 的培養(yǎng)皿中加入200l，100mm 的培養(yǎng)皿中加入500l) ，同時將培養(yǎng)皿置于冰上。 刮去電池，輕輕地?fù)u動懸掛，或者在冰冷的房間里用搖桿或者軌道振動器搖動15分鐘來溶解電池。 在冰水中用浴用聲波儀進(jìn)行聲波處理，直到樣品不再粘稠。 將細(xì)胞在12000克的溫度下4 °c 離心5分鐘，取出顆粒。 把上清液移到新鮮的管子里。 細(xì)胞裂解液的終濃度為2-3克 / 升。 對 wb 來說，在裂解液中加入4個 sds 停止緩沖液，終濃度為1個 sds。 免疫印跡法: 1。 煮沸10分鐘后，20-50升樣品將載入 sds 頁面。 對于大多數(shù)蛋白質(zhì)來說，建議以每道負(fù)荷量30-80克總?cè)芙獾鞍踪|(zhì)，因?yàn)榧?xì)胞中80% 的蛋白質(zhì)種類濃度非常低。 圖2。 將凝膠浸泡在免疫印跡轉(zhuǎn)移緩沖液中。 聚偏氟乙烯膜被推薦用于大多數(shù)蛋白質(zhì)。 將薄膜浸入甲醇中1-2分鐘，將薄膜在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡10分鐘，然后將其放置在一疊厚厚的浸過緩沖液的濾紙上。 然后用另一堆浸滿緩沖液的過濾紙蓋上。 把轉(zhuǎn)移裝置蓋上。 凝膠應(yīng)該在膜的負(fù)面。 圖3。 以每平方厘米1毫安的電流跑90分鐘。 圖4。 在室溫下或在4 °c 的溫度下用緩沖液將細(xì)胞膜孵育1小時。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 5. 用阻斷緩沖液稀釋一級抗體。 在室溫下將細(xì)胞膜培養(yǎng)1.5小時。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 圖6。 用阻斷緩沖液稀釋二級抗體。 在室溫下將細(xì)胞膜培養(yǎng)1小時。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 圖7。 用清洗緩沖液清洗隔膜310分鐘。 圖8。 用 ecl 顯色。
免疫沉淀法: 1。 將200-350升的細(xì)胞裂解液(含有1-3毫克總蛋白質(zhì))轉(zhuǎn)移到微濾管中。 加入150-300升培養(yǎng)液和1-4克一級抗體到細(xì)胞(或預(yù)先清除的)裂解液中。 JIA抗體濃度應(yīng)通過滴定法確定，用對照 igg (對應(yīng)于一抗源)建立陰性對照實(shí)驗(yàn)。 在4 °c 的環(huán)境中輕輕搖晃孵化箱2-4小時或過夜。3。 加入50升蛋白 a 或克瓊脂糖漿以獲得免疫復(fù)合物。在4 °c 下輕輕搖動混合物1-4小時。 取下端蓋，必要時將上清液從旋轉(zhuǎn)塔底部釋放出來，再懸浮混合物以提高流速。 用1湯匙含1個蛋白酶抑制劑的量清洗珠子5次。 后一次清洗后，用500克離心機(jī)將旋轉(zhuǎn)塔在4c 下離心30秒，用收集管收集過濾液，然后丟棄。 將自旋柱置于新鮮的微濾管中，并將洗脫液集中起來。 用40l 洗脫緩沖液洗脫，離心8000ー10000g，在4c 條件下洗脫1min，再用新的40l 洗脫緩沖液洗脫一次。 在洗脫液中加入10l 堿中和緩沖液和30l4樣品緩沖液，95-100c 加熱5分鐘。 存儲在零下20攝氏度或加載20-40升在 sds-頁面，并檢測它由寬帶。、
組織培養(yǎng)細(xì)胞免疫熒光方案: 1。 將細(xì)胞培養(yǎng)在小的圓形蓋玻璃上。 4% pfa 或有機(jī)溶劑固定細(xì)胞20分鐘在4 c (如果你使用有機(jī)溶劑固定，只需跳過步驟3，直接進(jìn)入步驟4)。 將玻璃倒入0.2% ttiton x-100-pbs 中5分鐘。4。 用 bsa-pbs 在室溫下封閉細(xì)胞1h 或在4 °c 下封閉過夜。 5. 在蓋玻片上加入50升特異性初級抗體，在室溫下的潮濕容器中培養(yǎng)1小時。 在每個蓋玻片上加入50升熒光標(biāo)記的二級抗體，室溫下在黑暗中的潮濕容器中孵育1小時。 用15% 的甘油或者小量的水溶液裝在載玻片上。8。 在邊緣用指甲油封住YIN唇。石蠟包埋組織切片的免疫組織化學(xué):。 二甲苯分別用兩種方法分離載玻片40分鐘和20分鐘。 轉(zhuǎn)移載玻片到100% 酒精，95% 酒精，80% 酒精，60% 酒精和 ddh2o5分鐘。 將載玻片放入裝有抗原恢復(fù)緩沖液的容器中，中間放置微波幾分鐘(700瓦烤箱) ，讓恢復(fù)液在室溫下冷卻。 用 tbs 清洗25分鐘。 在3% h2o2溶液中培養(yǎng)10分鐘，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。 用 tbs 清洗25分鐘. 7。 將5-10% 的山羊血清置于 tbs 液中室溫封閉30分鐘。 排水滑梯幾秒鐘(不要沖洗) ，擦拭圓形部分。9。 應(yīng)用 tbs 的一級抗體。 在室溫下孵化1小時或在4 °c 下孵化一夜。10。 用湯匙沖洗25分鐘。 在室溫下應(yīng)用預(yù)想的二級抗體30分鐘。 用 tbs 沖洗25分鐘13。 在室溫下用色原顯影，在顯微鏡下觀察。14。 用流動的自來水沖洗5分鐘。 在市長的蘇木精浴中反染30-60秒。 在水中洗7-8次，然后自來水3分鐘。17。 分別用60% 、80% 、95% 和100% 的酒精脫水5分鐘。 轉(zhuǎn)移到二甲苯5分鐘。 空氣30分鐘。19。安裝
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