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Transnetyx試驗(yàn)說(shuō)明
產(chǎn)品時(shí)間：2022-08-09
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北京華新康信也有transnetyx實(shí)驗(yàn)試劑銷售，對(duì)transnetyx組織常見(jiàn)問(wèn)題做了解答如下：
家/Transnetyx 組織常見(jiàn)問(wèn)題解答 | Transnetyx 組織
Soussou WV, Yoon GJ, Brinton RD, Berger TW (2007) 在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)形態(tài)和電生理學(xué)。IEEE 跨生物醫(yī)學(xué)工程。54:1309-1320。 下午：17605362
Brewer GJ, Cotman CW (1989) 海馬神經(jīng)元在低密度限定培養(yǎng)基中的存活和生長(zhǎng)：夾心培養(yǎng)技術(shù)或低氧的優(yōu)勢(shì)。大腦研究 494：65-74。下午：2765923。
預(yù)涂層 PDL 培養(yǎng)皿
1.你能推薦任何品牌的預(yù)涂層組織培養(yǎng)瓶或制備組織培養(yǎng)瓶用于原代神經(jīng)元生長(zhǎng)的方法嗎？
Transnetyx已經(jīng)確定，細(xì)胞培養(yǎng)塑料或玻璃上的聚-D-賴氨酸涂層在涂層后明顯開(kāi)始失去效力。鍍膜玻璃條在 14 天后失效，鍍膜塑料在 10 天后失效。 Transnetyx懷疑一些預(yù)涂板的效果令人滿意，但Transnetyx的經(jīng)驗(yàn)是，其中一些會(huì)導(dǎo)致原代神經(jīng)元的粘附和存活不良。因此，Transnetyx建議您在一周內(nèi)或上述幾天后涂抹您自己的基材并使用它們。
2.你們銷售預(yù)涂層培養(yǎng)皿嗎？
是的，Transnetyx銷售 PDL 涂層燒瓶、孔板和玻片。Transnetyx在一夜之間涂上這些涂層，并在第二天將它們運(yùn)送到隔夜交貨。Transnetyx建議您在一周內(nèi)使用這些。
新鮮紙巾
1.你們提供什么年齡的紙巾？
Transnetyx的標(biāo)準(zhǔn)組織是胚胎第 18 天或懷孕媽媽（3-4 個(gè)月大）的成人組織。所有其他組織年齡可用于特殊訂單，交貨時(shí)間為 2-3 周。
Wolburg H, Neuhaus J, Kniesel U, Krauss B, Schmid EM, Ocalan M, Farrell C, Risau W (1994) 調(diào)節(jié)血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞的緊密連接結(jié)構(gòu)。組織培養(yǎng)、第二信使和共培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響。J 細(xì)胞科學(xué) 107（第 5 部分）：1347-1357。 下午：1692329
Risau W, Engelhardt B, Wekerle H (1990) 血腦屏障的免疫功能：不完整的表現(xiàn)
體外大鼠腦微血管內(nèi)皮的蛋白質(zhì)（自身）抗原。細(xì)胞生物學(xué)雜志 110:1757-1766。 PM:7929640 有關(guān)從脊髓分離運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的更多信息 M. Das、JW Rumsey、N. Bhargava、M. Stancescu 和 JJ Hickman。確定的長(zhǎng)期體外神經(jīng)肌肉接頭組織工程模型。生物材料 31 (18):4880-4888, 2010. PM:20346499
2.你保證每瓶皮層和海馬有多少神經(jīng)元？
保證的神經(jīng)元數(shù)量為海馬體 100 萬(wàn)個(gè)或皮層神經(jīng)元 200 萬(wàn)個(gè)。其他組織類型的數(shù)字不同。
3 . 根據(jù) NIH 批準(zhǔn)的協(xié)議獲得動(dòng)物大腦和脊髓組織有什么保證？
Transnetyx的動(dòng)物協(xié)議 #233-08-013 已于 2020 年 4 月 7 日獲得南伊利諾伊大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)的批準(zhǔn)。
對(duì)于 NIH 撥款，脊椎動(dòng)物部分：
保證編號(hào)為 A-3209-01。
F. 脊椎動(dòng)物
用于原代培養(yǎng)的海馬、皮質(zhì)和其他腦和脊髓神經(jīng)元將從胚胎或出生后早期大鼠或小鼠的腦中獲得。用氟烷麻醉后將解剖大腦。將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉下被送上斷頭臺(tái)或斷頸。這些方法與美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)專家組的建議一致。
通過(guò)從動(dòng)物身上分離神經(jīng)元，可以研究比整個(gè)動(dòng)物研究更多的實(shí)驗(yàn)變量，從而減少對(duì)動(dòng)物的需求。大鼠和小鼠的大腦是所有動(dòng)物大腦中研究得好的。
平均住房需求估計(jì)為 2 天，足以讓嚙齒動(dòng)物從運(yùn)輸創(chuàng)傷中恢復(fù)。動(dòng)物將由獲得 AALAC 認(rèn)證的 SIUSM 實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物醫(yī)學(xué)中心負(fù)責(zé)照料，并在獲得 DACLAM 認(rèn)證的 Helen Valentine、DVM、MS 的指導(dǎo)下?lián)碛?span> 10 名員工
用氟烷麻醉后將解剖大腦。將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉下被送上斷頭臺(tái)或斷頸。這些方法與美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)專家組的建議一致。因此，這些程序?qū)?dòng)物的使用限制在進(jìn)行具有科學(xué)價(jià)值的研究中不可避免的范圍內(nèi)，并將動(dòng)物的不適、痛苦和疼痛降至低。
冷凍細(xì)胞
1.你們提供冷凍細(xì)胞系嗎？
目前，Transnetyx不提供冷凍細(xì)胞，也沒(méi)有冷凍細(xì)胞的方案。您可以請(qǐng)求快速凍結(jié)作為自定義選項(xiàng)，但需要支付額外的處理費(fèi)。
解離
2.海馬或皮層細(xì)胞的活力是否取決于解離的方法？你更喜歡機(jī)械解離還是酶解？
是的，使用木瓜蛋白酶可獲得更高的可行產(chǎn)量（參見(jiàn) J Neurosci Meth 71:143），但表面蛋白的消化是不可避免的。對(duì)于短期（少于 4 天），這是一個(gè)問(wèn)題。從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看，它可能并不重要。使用火拋光的 9 英寸玻璃移液管可獲得更高的存活率，使用藍(lán)色塑料移液管可獲得更低的能見(jiàn)度。對(duì)于 E18 組織，Transnetyx使用機(jī)械來(lái)提高速度和簡(jiǎn)單性。
3.您是否使用酶來(lái)制備皮質(zhì)培養(yǎng)物？
為了獲得更高的產(chǎn)量，Transnetyx使用了 2mg/mL 的 木瓜蛋白酶溶液， 稀釋在沒(méi)有 B27® 的 Hibernate® E-Ca 中。該溶液應(yīng)在 30 o C 水浴中孵育 10 分鐘。不應(yīng)向該溶液中添加其他化學(xué)物質(zhì)，例如 EDTA、巰基乙醇或半胱氨酸-HCl。請(qǐng)參閱Transnetyx的 原代神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)方案 了解更多信息。
4.為什么推薦 Hibernate® E-Ca without B27® 以實(shí)現(xiàn)與木瓜蛋白酶的最佳解離？
鈣促進(jìn)粘附。因此，去除鈣會(huì)促進(jìn)神經(jīng)元的解離。為了提供細(xì)胞粘附蛋白作為木瓜蛋白酶的主要底物，B27® 被省略，因此 B27® 中的蛋白質(zhì)不會(huì)競(jìng)爭(zhēng)底物。
文化
1. 原代細(xì)胞會(huì)增殖嗎？如果有，你能傳代多少次？
原代細(xì)胞不會(huì)增殖，不應(yīng)傳代。如果傳代，只有 30% 的細(xì)胞存活，細(xì)胞不能進(jìn)行第二次傳代。
2.你知道每瓶組織提供多少星形膠質(zhì)細(xì)胞嗎？
星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量是細(xì)胞數(shù)量的 20%。培養(yǎng)神經(jīng)元培養(yǎng)物時(shí)，使用不含血清 (NbActiv1™) 的培養(yǎng)基培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞含量低于 2% 的培養(yǎng)物。這在沒(méi)有 AraC 的情況下抑制了膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)。在培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞時(shí)，可使用含有血清（NbAstro™ - Neurobasal®/Horse Serum/GlutaMAX™）的培養(yǎng)基在 1.5 至 2 周內(nèi)使星形膠質(zhì)細(xì)胞匯合。
3.我應(yīng)該何時(shí)添加 AraC 作為星形膠質(zhì)細(xì)胞的有絲分裂抑制劑？
在Transnetyx推薦的 Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™ 培養(yǎng)基中，您根本不需要添加 AraC。培養(yǎng)基不會(huì)像血清那樣人為地刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖。
4.星形膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)增殖嗎？如果有，它們可以傳代多少次？
星形膠質(zhì)細(xì)胞確實(shí)增殖并且可以傳代。Transnetyx的 E18 星形膠質(zhì)細(xì)胞最多可成功傳代 4-5 次。
5.海馬神經(jīng)元何時(shí)表現(xiàn)出興奮性毒性？
乙酰膽堿在Transnetyx所知道的任何年齡都沒(méi)有毒性。
從 E18 海馬培養(yǎng) 7 天開(kāi)始，谷氨酸的毒性最大。皮層神經(jīng)元可能提前 1 或 2 天。
6.我的培養(yǎng)物被污染了。一開(kāi)始它們看起來(lái)很好，但現(xiàn)在介質(zhì)是混濁和黃色的，有許多 1-3 um 長(zhǎng)的暗相。
至少有 5 種可能的污染源（假設(shè)您的培養(yǎng)箱中的其他培養(yǎng)物沒(méi)有受到污染并且培養(yǎng)箱底部的加濕水是清澈的）：
培養(yǎng)容器本身可能是污染源。為了排除這種情況，將新鮮過(guò)濾的培養(yǎng)基添加到另一個(gè)培養(yǎng)容器中。如果介質(zhì)變黃或混濁，則容器已被污染。
粘合基材。這很常見(jiàn)。您可以將新鮮過(guò)濾的培養(yǎng)基放在準(zhǔn)備好的基材上，以尋找這種污染源。
培養(yǎng)基本身或其添加劑之一（例如谷氨酸）。這很常見(jiàn)。請(qǐng)務(wù)必在您的培養(yǎng)基的未涂層孔和Transnetyx提供的孔中進(jìn)行單獨(dú)的測(cè)試。
看似隨機(jī)或低水平的污染可能來(lái)自于向開(kāi)放文化的方向說(shuō)話甚至呼吸。此外，無(wú)菌罩和培養(yǎng)箱之間的空氣不是無(wú)菌的，并且大多數(shù)培養(yǎng)容器沒(méi)有密封。如果從通風(fēng)罩到培養(yǎng)箱的距離很遠(yuǎn)，您可以將培養(yǎng)物放入已用 70% 乙醇沖洗過(guò)的塑料食品容器中。
組織。雖然Transnetyx對(duì)Transnetyx提供的培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌測(cè)試，但組織本身無(wú)法測(cè)試。如果您能提供證據(jù)證明您的紙巾按時(shí)送達(dá)并在 4 o C 下保存直到使用，并且排除了上述 4 種可能性，請(qǐng)致電Transnetyx進(jìn)行一次性更換。通常，Transnetyx的經(jīng)驗(yàn)是，您的樣品是Transnetyx本周所有發(fā)貨中被污染的樣品，因此請(qǐng)理解Transnetyx需要進(jìn)行上述測(cè)試。
7.我想知道你能否給我建議，我需要多少個(gè)細(xì)胞，才能獲得足夠的蛋白質(zhì)來(lái)進(jìn)行幾次蛋白質(zhì)印跡？即，多少個(gè)細(xì)胞等于 20-50 ug 蛋白質(zhì)？
根據(jù) Patel 和 Brewer (2003) 的說(shuō)法，每 18,000 個(gè)培養(yǎng)一周的細(xì)胞含有大約 6 ug 的蛋白質(zhì)。因此，3000 個(gè)細(xì)胞/ug 蛋白質(zhì)。需要大約 50 g 蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡提取物需要大約 150,000 個(gè)細(xì)胞。
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其他的這些是菌株
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71-098L moltox青海實(shí)驗(yàn)試劑，moltox河南實(shí)驗(yàn)試劑，moltox河北實(shí)驗(yàn)試劑，moltox山西實(shí)驗(yàn)試劑moltox陜西實(shí)驗(yàn)試劑
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